BAC文库几种形式间的比较


不同形式的BAC文库之间联系与区别


相较于其他形式的基因组文库,BAC文库由于其明显的技术优势,成为当前最受欢迎的基因组克隆技术。目前市场上所提供的BAC文库,根据其不同的保存形式可分为非阵列、阵列和池化三种形式,每种形式的BAC都各具其优缺点:


一、 非阵列BAC文库,这类文库一般以试管甘油菌的形式保存,客户在接收这类文库后,需要重新涂板培养、阵列或池化后,才能用于下一步的实验研究。这类文库的优势就是价格相对便宜,但缺点也很明显,需要耗费大量人力物力才能用于进一步的研究,这类文库一般只适合那种想节省经费的大课题组。而对于小的基因组文库来说,非阵列BAC文库显得费时费力不是很理想的选择。


 二、 阵列BAC文库,这类文库一般以384孔板的形式保存,客户接收后可以直接用于筛选和分离克隆等试验研究。这种文库的最大的优势就是每个孔中只含有的一个原始克隆,可快速进行杂交筛选,非常适合基因组测序和物理图谱构建。但是阵列文库也具有其明显的劣势:首先阵列文库需要很大的空间来保存,特别是对那些基因组很大的物种来说,几乎要占据整个甚至多个冰箱的体积,不利于长期保存。其次,由于工程菌在解冻后就无法再继续有效地保存(解冻后再冷冻保存的细菌会出现退化甚至死亡的现象),因此阵列文库只能使用一次,对于那些短期内只想克隆少量克隆的科学家来说会比较浪费。另外,三种形式的BAC文库中,阵列文库也是价格最高的。所以除用于基因组测序或图谱构建外,阵列文库一般只推荐用于小基因组物种(如细菌等原核生物或一些基因组较小的真核生物)。


 三、 池化BAC文库,顾名思义,池化文库就是将BAC克隆归群、分开保存,此类文库一般保存于96深孔板中。客户在拿到这类文库后也可以直接进行克隆筛选和分离等试验研究。相较于阵列BAC文库,池化BAC文库其实就是在其基础上的一种保存形式的优化,其优势有:首先,池化文库大大减少了文库所占体积,十分方便于长期保存。其次,池化文库在使用时,不需要全部解冻,可以多次使用(一个池化文库可以使用几十甚至上百次);菌种复苏和再保存也十分简单。另外,文库构建商一般都会为该类产品保留备份,增强对抗如停电等而使得菌体解冻等风险的能力。最后,相对于阵列文库来说,池化文库的价格会便宜很。不过由于池化文库每个孔中含有数百个原始克隆且经过了培养放大,所以池化文库无法用于基因组测序和物理图谱构建。对于更多的只是用于某些基因克隆等应用的科学家,或者那些想进一步挖掘文库应用潜能的科学家们来说,池化文库会是其最佳的选择。


综合比较池化文库的自身优势还是很明显的,其性价比高、可重复利用、方便保存日益被广泛接受。池化文库已成为当前国际上大型基因组建库的首选,在我们接触的客户中大部分的科学家也都是采用这种类型的BAC文库。