Fosmid和Cosmid文库构建


        Fosmid克隆的平均插入偏低(大小约40kb)与cosmid类似,但是与BAC克隆一样,它们含有衍生自F因子的复制子来用于DNA复制和分离。因此它们能以低拷贝数存在,比cosmid更加稳定。另外,这种拷贝控制载体使得我们可以更容易地从fosmid克隆中纯化出质粒DNA。


        Fosmid文库通常用于填补基因组序列中的缺口,物理图谱构建,宏基因组和表达筛选等。与BAC文库的大插入片段相反,Fosmid文库不需要HMW DNA(通常为2Mb)作为起始材料。 这也使得客户在提供DNA构建文库时具有一定的灵活性。

        

          Fosmid和Cosmid文库作为两种类似的黏粒载体文库,除具有基本大小相同的插入片段外还分别具有其特点:

☆  Fosmid载体是当前流行的用于替代Cosmid载体构建大片段文库的新载体。

☆  与BAC文库构建相比,Fosmid文库的构建更简单,快速并具有以下优点:

♦  由于插入了大肠杆菌致育因子F-因子,所以它在宿主菌中以单拷贝形式存在,稳定性好。

♦  Fosmid载体上有一个可诱导的oriV高拷贝复制起始点,需要时可诱导达到高拷贝。

♦  随机性好,保证了每 段DNA在文库中出现的频率均等。

         正因以上各种优势,近年来,Fosmid文库已被广泛应用于基因的图位克隆、物理图谱的构建和比较基因组研究中。

        相对于Fosmid克隆,Cosmid克隆具有多拷贝的特点,因此其也会更容易称王筛选和提取到目的基因DNA.


Fosmid文库构的相关细节


1、  fosmid文库构建的关键步骤是制备合适的插入片段用于克隆到fosmid载体中。为了确保插入片段的随机性,我们的fosmid文库是通过使用专有方法随机物理剪切高分子量DNA来构建的。 物理随机剪切的fosmid文库将大大降低下游应用(如末端测序和筛选)的成本。

2、  保证文库高质量和基因组覆盖度。我们专有的高效克隆方法可以保证客户需要的高质量和基因组覆盖度,插入片段的大小总是均匀的,范围在35-45Kb之间,我们优化的方法可靠,快速和具有成本效益。

3、  我们可以提供阵列与非阵列的文库,我们还提供阳性克隆的客户库筛选。拷贝控制载体使得我们可以更容易地从fosmid克隆中纯化出质粒DNA。


igure 1: Physically sheared HMW DNA (Lane 1: un-sheared, Lanes 2-4: sheared).
Physically sheared HMW DNA

Guaranteed high quality and genome coverage:


Proprietary high efficiency cloning methods guarantee high quality and genome coverage that customers need. Obtained inserts sizes are always uniform and range within 35-45Kb (Please see below Figure 2). Our optimized methods are reliable, fast and cost effective.


Figure 2: Size determination of fosmid clones.