均一化cDNA文库


我们使用我们自有的技术为客户构建cDNA文库,我们的cDNA文库产品都是采用全长富集,高质量的大小分级和定向克隆的cDNA构建的。

我们的相关服务

★  文库的池化和扩增分别可以在液体或半固体培养基中完成。
★  提供Duo-range文库构建服务:2个总共包含150万个克隆的亚库。
★  可以提供不同大小的插入片段范围(例如:500bp-2Kb和2Kb-4Kb)供客户选择,最大化文库的灵活性和可表示性。

★  我们可以根据客户的需求选择不同的载体,也可按客户的需求对载体进行改造。

我们的承诺

■  高丰度cDNA的量将大幅度下降。高丰度转录产物的减少对发现罕见转录物是十分必要的, 对于一个标准化cDNA文库,通常10-20个丰富基因的mRNA占细胞mRNA质量的至少20%,几百个中等丰度基因可包含40-60%的mRNA质量,几千个稀有基因(每个细胞<10个mRNA拷贝)则只占mRNA质量的20-40%。 因此,标准化cDNA文库的随机测序是十分低效的,并且非常昂贵。为了发现稀有的转录产物,在测序前降低这些高丰度转录产物的百分比是十分必要的。

■  严格控制cDNA均一化的效率。除了对cDNA群均一化外,我们还将进行平行标准化。 在平行标准化中,报告基因将被添加到cDNA群中作为对照,这种对照基因在均一化前后的百分比很容易测得,也使我们能更好地控制均一化的效果。在此操作后高丰度cDNA可以下降到400倍以上,极大地增加了稀有cDNA的发现率。

■  均一化文库所使用的cDNA分子都是长序列。我们采用杂交均一化方法来避免建库过程中插入带有明显缺失的片段。

■  均一化文库所使用的cDNA分子都是全长富集。我们采用独有的方法合成全长富集cDNA并进行均一化。富含具有完整的5'和3'非翻译区(UTR)编码序列的克隆的cDNA文库对高通量转录组分析来说是非常具有价值。

■  均一化文库中的cDNA都将被定向克隆。定向克隆对双向测序,PCR筛选和表达十分有利。

■  低空载背景,高达99%的克隆带有有效插入片段。


Figure 1: Reduction in abundant transcripts after normalization.


Figure 2: Insert size determination of a normalized library.


Please note the absence of the redundant bands following the normalization procedure as well as the large size of the cDNAs.